無菌室實驗操作過程中要注意什么？有哪些必須遵守的條件？

一、無菌室的級別：

根據(jù)空氣潔凈度的不同，無菌室可分為哪幾個級別一般情況下，無菌室的等級有百級，千級，萬級，十萬級，百萬級等等。

凈化等級一般分為100級、1000級、10000級、100000級，現(xiàn)在2010年版的GMP 凈化車間已經(jīng)不用這個叫法了，分為ABCD級別，分別相對應(yīng)于98版的幾個級別，通過檢測區(qū)域內(nèi)的塵埃粒子數(shù)、浮游菌數(shù)、沉降均數(shù)評價凈化級別，各個級別 有不同的要求，凈化等級分靜態(tài)、動態(tài)兩種。

無菌室設(shè)計建設(shè)要點：

無菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗。工作臺的臺面應(yīng)該處于水平狀態(tài)。無菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無菌室的紫外線燈距離工作臺面 1 米。工作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)穿滅過菌的服裝，戴帽子。

當(dāng)前無菌室多存在于微生物工廠，一般實驗室則使用超凈臺。超凈臺其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過電動裝置使空氣通過高效過濾器具后進(jìn)入工作臺面，使臺面始終保持在流動無菌空氣控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流動的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。

在條件較困難的地方，也可以用木制無菌箱代替超凈臺。

無菌箱結(jié)構(gòu)簡單，便于移動，箱正面開有兩個洞，不操作時用推拉式小門擋住，操作時可以將雙臂伸進(jìn)去。正面上部裝有玻璃，便于在內(nèi)部操作，箱內(nèi)部裝有紫外線燈，從側(cè)面小門可以放進(jìn)去器具和菌種等。

二、無菌室操作規(guī)范

1.無菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

2.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

3.無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。

4.無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

5.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。

6.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

7.無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，證明無菌后，取平板3-5個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30-35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度，應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。